• Bagikan:
• 
• 
• 
• 
• 
• 
• 

Text  

Produksi TrombinTerotoaktivasi Rekombinan Pada Pichia pastoris SMD1168 Sebagai Komponen Lem Fibrin

---

• Ketersediaan
• Informasi Detil
• Deskripsi
• Versi lain/terkait
• Komentar

• Code	CallNo	Lokasi	Ketersediaan
  D4545	D4545	Perpustakaan Sekolah Pascasarjana	Tersedia

• Perpustakaan	Sekolah Pascasarjana
  Judul Seri	-
  No. Panggil	D4545
  Penerbit	: Bandung., 2017
  Deskripsi Fisik	-
  Bahasa	Indonesia
  ISBN/ISSN	-
  Klasifikasi	NONE
  Tipe Isi	-
  Tipe Media	-
  Tipe Pembawa	-
  Edisi	-
  Subyek	Produksi TrombinTerotoaktivasi Rekombinan Komponen Lem Fibrin
  Info Detil Spesifik	-
  Pernyataan Tanggungjawab	-

• Lem fibrin (LF) merupakan material perekat jaringan yang dapat digunakan sebagai pengganti teknik jahitan. LF terdiri atas komponen trombin dan fibrinogen. LF komersil yang bersumber dari sapi atau manusia masih mungkin dapat menimbulkan transmisi penyakit dan respon imun. Pusat Mata Nasional RS Cicendo telah mengunakan LF otologus sebagai teknik pengganti jahitan bagi pasien yang mengalami pembedahan mata. Penggunaan LF banyak memberikan keuntungan namun penyediaan komponen trombin selain rumit juga memerlukan waktu yang lebih lama dari fibrinogen. Teknologi rekombinan memungkinkan trombin manusia untuk diproduksi secara melimpah melalui sel inang Pichia pastoris yang telah lama digunakan untuk mengekspresikan protein plasma manusia. Pretrombin-2 rekombinan telah digunakan sebagai prekursor terkecil untuk menghasilkan trombin rekombinan aktif dengan penambahan ekarin dalam proses aktivasinya. Pengubahan beberapa residu asam amino pada pretrombin-2 rekombinan dapat menghasilkan trombin rekombinan yang langsung aktif (terotoaktivasi) tanpa proses aktivasi oleh ekarin. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan kontruksi galur unggul P. pastoris SMD1168 yang mampu mengekspresikan trombin terotoaktivasi rekombinan (rTrmOto) dari gen sintetik rTrmOto yang telah dioptimasi sesuai preferensi kodonnya, mengoptimalkan kondisi kultivasi pada proses ekspresi, memurnikan rTrmOto dengan kromatografi penukar anion serta menguji aktivitas dan efikasi rTrmOto. Hasil penelitian menunjukkan galur unggul P. pastoris SMD1168 yang mengandung pPICZαB-rTrmOto telah mampu mengekspresikan gen tersebut secara ekstraselular dan keberadaan rTrmOto (~35kDa) tetap terjaga selama kultivasi. Kondisi kultivasi galur unggul dalam mengekspresikan rTrmOto sangat dipengaruhi oleh konsentrasi mineral kelumit Pichia (Pichia Trace Mineral/ PTM) dan pHawal dengan kondisi optimal konsentrasi PTM 2,05% dan pHawal 4,2. Protein rTrmOto dihasilkan sebagai komponen utama pada media kultivasi, pemurnian dengan kromatografi penukar anion membebaskan lebih lanjut komponen pengotor dengan aktivitas spesifik rTrmOto 2,7389 U/mg, perolehan kembali 22%, dan tingkat kemurnian 5 kali. rTrmOto yang dihasilkan dari galur unggul memiliki aktivitas pada substrat kromogenik S-2238 dan menunjukkan efikasi sebagai komponen lem fibrin dalam merekatkan jaringan mata secara in vitro pada mata babi dan secara in vivo pada mata kelinci hidup. Kata kunci: lem fibrin, trombin terotoaktivasi rekombinan, P. pastoris SMD1168, gen sintetik. ABSTRACT Fibrin sealant is a tissue adhesive material that can be used as a suture substitute in surgery. It consists of thrombin and fibrinogen. The risk of viral transmission and allergic response may rise in the use of thrombin or fibrinogen derived from bovine or human plasma. National Eye Centre RS Mata Cicendo has used autologous fibrin sealant as a suture substitute for eye surgery patient. The use of fibrin sealant gives some advantage,but the preparation of thrombin is not only time consuming but also is more complicated. Production technology of recombinant protein might facilitate the production of recombinant human thrombin from Pichia pastoris. It is a well-known host used to produce human plasma protein. Recombinant prethrombin-2 is the smallest precursor that can be activated by ecarin to produce active recombinant thrombin. Some mutations of amino acid residue in recombinant pretrombin-2 can generate autoactivated thrombin without activation process by ecarin. The objectives of this research are to construct a prime cell line of P. pastoris SMD1168 which is able to express autoactivated thrombin (rTrmOto) from optimized rTrmOto synthetic gene, to optimize the cultivation condition for rTrmOto expression, to purify the expressed rTrmOto with anionic exchange chromatography, and to determine the activity and functionality of rTrmOto. The result showed that the prime cell line P. pastoris SMD1168 was able to express rTrmOto extracellularly and rTrmOto (~35 kDa) was kept intact during cultivation. Cultivation condition of the prime cell line in expressing rTrmOto was influenced significantly by the Pichia Trace Mineral (PTM) concentration and initial pH with optimum condition 2.05% and 4.2, respectively. rTrmOto was expressed as the main component in cultivation medium, the purification with anion exchange chromatography removed impurities further and resulted rTrmOto specific activity 2.7389 U/mg, 22% yield, and 5 times purification level. Expressed rTrmOto had activity on chromogenic substrate S-2238, and functionality as fibrin sealant component in adhering tissue on swine eye (in vitro) and rabbit eye (in vivo). Keywords: fibrin sealant, autoactivated thrombin, P. pastoris SMD1168, synthetic gene.

• Tidak tersedia versi lain

• Silakan login dahulu untuk melihat atau memberi komentar.